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Asian J Beauty Cosmetol > Volume 23(4); 2025 > Article
등갈퀴나물(Vicia cracca) 추출물의 항산화 활성 및 식물화학 성분 분석

요약

목적

본 연구는 등갈퀴나물(Vicia cracca) 추출물의 항산화 활성 및 식물화학 성분을 분석하여, 화장품 원료로서의 활용 가능성을 평가하고자 수행되었다.

방법

Vicia cracca는 70% 에탄올을 이용하여 초음파 추출법으로 추출하였다. 항산화 능력은 DPPH 및 ABTS 라디칼 소거능 평가를 통해 분석하였고, 총 폴리페놀과 플라보노이드 함량은 각각 Folin-Ciocalteu법과 알루미늄 클로라이드 색도법을 이용하여 정량하였다. 식물화학 성분은 C18 컬럼과 그라디언트 용리 조건을 적용한 UHPLC를 통해 분석하였다.

결과

DPPH 및 ABTS 소거능은 농도 의존적으로 증가하였으며, EC50 값은 각각 3.65 mg/mL, 2.30 mg/mL로 확인되었다. 총 폴리페놀 함량은 27.4±1.1 mg GAE/g dry weight, 총 플라보노이드 함량은 14.9±0.7 mg QE/g dry weigh로 나타났다. UHPLC 분석 결과, diosmin을 포함한 15종의 유효 성분이 검출되었으며, 이 중 diosmin의 함량이 가장 높았다.

결론

Vicia cracca 추출물은 우수한 항산화 활성을 보이며 다양한 생리활성 식물화학 성분을 함유하고 있어, 천연 항산화 화장품 원료로서의 활용 가능성을 지니고 있다. 본 연구는 향후 피부 관련 효능 평가를 위한 기초자료로 활용될 수 있다.

Abstract

Purpose

In this study, we investigated the antioxidant properties and phytochemical composition of Vicia cracca extract to evaluate its potential as a natural ingredient for cosmetic applications.

Methods

Vicia cracca was extracted via ultrasonic-assisted extraction using 70% ethanol. DPPH and ABTS radical scavenging assays were employed to assess the extract’s antioxidant capacity. The total phenolic and flavonoid contents were quantified using the Folin–Ciocalteu and aluminum chloride colorimetric methods, respectively. Phytochemical profiling was performed via ultra-high-performance liquid chromatography (UHPLC) with a C18 column under gradient elution conditions.

Results

The extract exhibited dose-dependent radical scavenging activities in both the DPPH and ABTS assays, with half maximal effective concentration (EC50) values of 3.65 mg/mL and 2.30 mg/mL, respectively. The total phenolic content was 27.4±1.1 mg GAE/g dry weight, and the total flavonoid content was 14.9±0.7 mg QE/g dry weight. UHPLC analysis revealed the presence of 15 phytochemical compounds, with diosmin identified as the most abundant constituent.

Conclusion

Vicia cracca extract exhibits significant antioxidant activity and contains a variety of bioactive phytochemicals. The findings of this study support the potential of Vicia cracca extract as a natural antioxidant ingredient in cosmetic formulations and provide a foundation for further research into its skin-related functionalities.

中文摘要

目的

分析广布野豌豆提取物的抗氧化活性和植物化学成分,并评估其作为化妆品原料的潜力。

方法

采用超声波提取法,以70%乙醇为溶剂提取野豌豆(Vicia cracca) 。通过DPPH和ABTS自由基清除活性测定分析其抗氧化活性,并分别采用Folin-Ciocalteu法和氯化铝色谱法定量分析总多酚和总黄酮含量。采用超高效液相色谱法(UHPLC),使用C18色谱柱和梯度洗脱条件分析其植物化学成分。

结果

DPPH和ABTS清除活性均呈浓度依赖性增加,EC50 值分别为3.65 mg/mL和2.30 mg/mL。总多酚含量为27.4±1.1 mg GAE/g dry weight,总黄酮含量为14.9±0.7 mg QE/g dry weight。UHPLC分析结果显示,共检测到15种有效成分,其中diosmin含量最高。

结论

广布野豌豆提取物具有优异的抗氧化活性,并含有多种生物活性植物化学成分,表明其具有作为天然抗氧化化妆品成分的潜力。本研究可为未来评估其对皮肤的功效提供基础数据。

Introduction

21세기 들어 전 세계적으로 급격한 고령화가 진행되고 있으며, 공중 보건의 향상과 사회경제적 환경 변화 등 비약적인 의학 및 과학의 발전으로 평균 수명이 크게 연장되었다(Gianfredi et al., 2025; Chalise, 2022). 이러한 인구학적 변화로 단순한 생존을 넘어 ‘건강한 노화(healthy aging)’에 대한 관심이 높아지고 있으며, 웰빙 중심의 라이프스타일 확산과 함께 피부 건강 및 항노화에 대한 수요가 커지고 있다(Hoang et al., 2021; Juliano & Magrini, 2018). 노화는 유전적·후성유전적 변화와 면역체계의 기능 저하가 복합적으로 작용하여 조직과 장기의 기능을 약화시키고, 심혈관·신경퇴행성 질환 및 암 등 연령 관련 질환의 위험을 높이는 생물학적 과정이다(Sen et al., 2016; Yousefzadeh et al., 2021). 특히, 활성산소(ROS)에 의한 산화 스트레스는 노화의 주요 분자적 기전으로 알려져 있으며, DNA, 단백질, 지질 등 다양한 생체분자에 손상을 줄 수 있으며, 세포 기능 저하 및 세포 사멸을 일으킨다(Liguori et al., 2018; Maldonado et al., 2023). 고농도의 ROS는 미토콘드리아 기능 저하 및 mtDNA 손상과도 관련이 있어 연령 관련 질환을 촉진하는 주요 인자로 작용한다(Cui et al., 2012; Tsang et al., 2022; Maldonado et al., 2023). 항산화 방어기전의 조절은 질병 예방 및 피부 보호에 중요한 역할을 한다(Papaccio et al., 2022; Zhang & Duan, 2018).
식물 유래 항산화 소재는 ROS 제거 및 금속 이온 킬레이션 작용을 통해 산화적 손상을 억제하는데 효과적이며, 폴리페놀과 플라보노이드가 중요한 생리활성 물질이다(Tsao, 2010; Panche et al., 2016). 이러한 성분은 항산화뿐 아니라 항염, 항암, 항돌연변이 효과를 가지고 있으며, 다양한 세포 효소 억제 기능이 있다(Kumar & Pandey, 2013; Al-Khayri et al., 2022; Cizmarova et al., 2023). 특히 플라본과 카테킨은 강력한 자유 라디칼 소거 작용을 통해 피부 노화 방지에 효과적인 것으로 보고되었다(Zheng et al., 2024; Merecz-Sadowska et al., 2021; Mita et al., 2024).
식물은 고부가가치 활성 물질을 생성할 수 있는 중요한 자원으로 의약품 및 화장품에 광범위하게 활용될 수 있다(Faccio, 2020). 특히 국내 자생식물의 환경적 책임이 강조되면서, 천연 소재를 기반으로 한 항산화, 항염, 미백 활성 연구가 꾸준히 보고되고 있다(Lee & Kim, 2020; Lee & Kim, 2023; Jin et al., 2012). 이와 함께 식물 유래 성분의 피부 효능과 안정성을 분석하고 이를 기능성 화장품에 응용하려는 시도도 증가하고 있다(Hoang et al., 2021; Michalak, 2022; Mita et al., 2024). 특히 친환경적이고 안전한 생리활성 물질에 대한 관심이 높아지면서, Camellia sinensis, Brassica juncea 등의 자생식물에 대한 평가 연구도 활발히 진행되고 있다(Hoang et al., 2021; Michalak, 2022; Mita et al., 2024).
Vicia 속 식물은 전통적으로 약용 또는 사료작물로 활용되어 왔으며, 항산화, 항염, 간 보호 등의 생리활성을 지닌 것으로 보고되어 있다(Nam et al., 2012; Myrtsi et al., 2023). 이 중 Vicia cracca는 국내에 자생하는 콩과 식물로, 최근 연구에서 메탄올 추출물이 in vitroin vivo 모델에서 항산화 및 간 보호 활성이 확인되었다(Shokrzadeh et al., 2018).
그러나 Vicia cracca 추출물의 기능성 화장품 원료로서의 활용 가능성에 대한 연구는 아직 부족한 실정이다. 기존 연구들이 항산화 효능을 일부 실험에 한정해 간략히 보고한 데 그친 반면, 본 연구는 Vicia cracca 추출물의 항산화 활성을 DPPH 및 ABTS 라디칼 소거능, 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량 분석, 그리고 UHPLC 기반 유효 성분 정량을 통해 정량적이고 체계적으로 평가하였다. 이를 통해 Vicia cracca 추출물의 주요 생리활성 성분을 규명하고 기능성 화장품 원료로서의 가능성을 확인하고자 하였다.

Methods

1. 추출물

원료로 사용된 Vicia cracca는 대한민국 청주에서 채취하여 실온에서 건조 후 분쇄하였다. 분쇄된 시료는 70% 에탄올(EtOH)과 1:100 (w/v) 비율로 혼합한 뒤, 초음파 추출기(40 kHz 조건)에서 1시간 동안 추출하였다. 추출액은 Whatman No. 2 filter paper (Whatman, UK)로 여과한 후 농축·건조하여 최종 추출물로 사용하였으며, 수율을 계산하였다(수율 36.0%, Table 1).

2. DPPH 라디칼 소거능 측정

2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH; Sigma-Aldrich, USA)은 70% 에탄올에 용해하여 540 nm에서 흡광도 1.0이 되도록 조정하였다. 시료는 동일한 용매로 희석한 후, 0.2 mL의 시료 용액과 1.0 mL의 DPPH 용액을 혼합하여 암실에서 20 min간 반응시켰다. 반응액 100 μL를 96-well plate (Corning, USA)에 옮겨 Microplate Reader (Synergy HT; BioTek, USA)를 이용해 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 ascorbic acid (AA; Sigma-Aldrich) 0.16 mg/mL를 사용하였으며, Vicia cracca추출물(0.06-32.00 mg/mL)과 동일한 조건에서 라디칼 소거능을 평가하였다. Ascorbic acid의 50% 소거농도(IC50)는 0.021 mg/mL로 확인되었으며, 이 농도는 DPPH라디칼 소거능의 기준 값으로 사용되었다.

3. ABTS 라디칼 소거능 측정

2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS; Sigma-Aldrich)은 7 mM ABTS와 2.45 mM ammonium persulfate를 혼합하여 암실에서 8 h 발색시킨 후, 70% 에탄올로 740 nm 파장에서 흡광도 1.0이 되도록 희석하였다. Vicia cracca 추출물은 동결 건조된 분말을 70% 에탄올에 용해하여 0.06-32.00 mg/mL 범위로 희석하여 사용하였다. 각 시료 0.2 mL와 ABTS 용액 1.0 mL를 혼합하여 암실에서 20 min간 반응시킨 후, 반응액 100 μL를 96-well plate (Corning, USA)에 옮겨 Microplate Reader (Synergy HT; BioTek, USA)를 이용해 760 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 ascorbic acid (AA; Sigma-Aldrich) 0.16 mg/mL를 사용하였으며, Vicia cracca 추출물과 동일한 조건에서 라디칼 소거능을 평가하였다. Ascorbic acid의 50% 소거농도(IC50)는 0.0160 mg/mL로 확인되었으며, 이 농도는 ABTS 라디칼 소거능의 기준 값으로 사용되었다.

4. 총 폴리페놀 함량 분석

Folin-Ciocalteu 원법을 참고하여 수행하였다(Singleton & Rossi, 1965). 본 실험에 사용된 Vicia cracca 추출물은 동결건조된 분말을 70% 에탄올에 용해하여 액상 시료로 조제하였다. 시료 용액 50 μL에 증류수 650 μL및 Folin-Ciocalteu 시약(Junsei, Japan) 50 μL를 첨가하고 6 min 후 7% Na2CO3 (Wako, Japan) 용액 500 μL를 더한 뒤 실온에서 90 min 반응시켰다. 흡광도는 분광광도계(UV-1800; Shimadzu, Japan)를 이용해 760 nm에서 측정하였다. 결과는 갈산(gallic acid, TCI, Japan) 기준으로 mg GAE/g dry weigh로 환산하였다.

5. 총 플라보노이드 함량 분석 (TFC)

변형된 알루미늄 클로라이드 색도법(Chang et al., 2002)을 기반으로 수행하였다. 본 실험에 사용된 Vicia cracca 추출물은 동결건조 분말을 70% 에탄올에 용해하여 액상 시료로 조제하였다. 시료 용액 100 μL에 증류수 640 μL와 5% NaNO 2 (Daejung, Korea) 30 μL를 첨가하여 5 min간 반응 후, 10% AlCl3 (Junsei, Japan) 30 μL를 첨가하였다. 1 min 후 1 M NaOH (Wako, Japan) 200 μL를 추가하고 510 nm에서 흡광도를 측정하였다. 총 플라보노이드 함량은 퀘르세틴(quercetin, TCI, Japan) 기준으로 mg QE/g dry weight로 계산하였다.

6. UHPLC를 이용한 유효 성분 분석

유효 성분의 정성 및 정량 분석은 Vanquish Flex UHPLC 시스템 (Thermo Fisher Scientific, USA)과 TSQ Altis 질량분석기(Thermo Fisher Scientific, USA)를 연결하여 수행하였다. 컬럼은 Agilent Eclipse Plus C18 (4.6×250 mm, 5 μm; Agilent Technologies, USA)을 사용하였으며, 이동상은 (A) 1% acetic acid를 함유한 정제수와 (B) 1% acetic acid를 함유한 acetonitrile로 구성하였다. 유속은 0.3 mL/min, 컬럼 온도는 40℃로 유지하였고, Vicia cracca 추출물의 동결건조 분말을 메탄올(MeOH)에 용해하여 조제한 시료 용액 10 μL를 주입하여 30 min간 용매 B의 농도를 5%에서 95%까지 변화시키는 gradient 조건으로 분리하였다. 검출은 다이오드 어레이 검출기(DAD)와 전기분무 이온화(ESI) 방식의 질량분석기를 이용하였으며, ESI는 음이온 모드(negative ion mode)에서 수행되었다. 각 피크의 머무름 시간(retention time, RT)과 질량 대 전하비(m/z) 값은 Chromeleon 7 소프트웨어로 분석하였고, 표준물질(diosmin, luteolin 7-rutinoside, afzelin, salidroside 등)의 RT 및 m/z 값과 비교하여 동정하였다. 따라서 검출된 성분은 RT 및 m/z 값을 기반으로 확인하였다.

Results and Discussion

1. DPPH 소거능을 이용한 항산화능 측정

Vicia cracca 추출물의 DPPH 라디칼 소거능은 농도의존적으로 유의성 있게 증가하였으며(p<0.05; p<0.01; p<0.001), 32 mg/mL에서 98.5%의 최대 활성을 나타냈다. IC50 값은 3.65 mg/mL로, 양성대조군인 ascorbic acid의 IC50 값(0.210 mg/mL)에 비해 더 높은 농도에서 활성을 나타냈으나, 농도 의존적으로 뚜렷한 소거 효과를 보여 항산화 활성이 우수함을 확인하였다(Figure 1). Ascorbic acid가 단일 물질인 반면, Vicia cracca 추출물은 다양한 성분이 혼합된 복합체로, 단일 항산화 반응을 넘어 여러 기전을 통해 작용할 가능성을 지닌다. 따라서 본 결과는 단순 효율 비교보다는 복합 추출물의 다기능적 항산화 특성의 근거로 해석된다.

2. ABTS 소거능을 이용한 항산화능 측정(ABTS assay)

ABTS assay 결과(Figure 2), Vicia cracca 추출물은 라디칼 소거능이 농도의존적으로 유의성 있게 증가하였으며(p<0.05; p<0.01; p<0.001), 32 mg/mL에서 97.4%의 최대 활성을 나타냈다. IC50는 2.30 mg/mL로, 양성대조군인 ascorbic acid의 IC50 값 0.0160 mg/mL보다 높은 농도에서 활성을 나타냈으나, 농도의존적으로 뚜렷한 수용성 라디칼 소거 효과를 보여, 우수한 항산화 활성을 확인할 수 있었다. 이는 DPPH 분석과 일관된 결과로, 추출물이 지용성(DPPH)과 수용성(ABTS) 환경 모두에서 항산화 활성을 지님을 시사한다. 이러한 결과는 Vicia 속 식물이 플라보노이드와 폴리페놀을 풍부하게 함유한다는 선행연구(Lee & Kim, 2023; Shokrzadeh et al., 2018)와도 일치하며, 본 추출물이 다양한 조건에서 항산화 작용을 나타낼 수 있는 기능성 화장품 원료임을 뒷받침한다.

3. 폴리페놀 함량

총 폴리페놀 함량은 gallic acid를 기준으로 한 표준곡선(y=0.5494x+0.1064, R2=0.9983)을 이용해 산출하였다. 평균 흡광도는 0.274±0.011 mg/mL였으며, 환산 결과 27.4±1.1 mg GAE/g dry weight로 나타났다(Table 2). 이는 국내 식물 소재 중 중간 이상 수준에 해당하며, 선행연구(Lee & Kim, 2020; Jin et al., 2012)에서 보고된 Brassica junceaZanthoxylum schinifolium 추출물의 총 폴리페놀 함량(각각 24.7 및 21.8 mg GAE/g)보다 높은 수치를 나타내었다. 본 연구의 Vicia cracca 추출물(27.4±1.1 mg GAE/g)은 상대적으로 높은 폴리페놀 함량을 보유하여, 항산화 활성을 유도할 수 있는 생리활성 물질을 풍부하게 포함함을 시사한다.

4. 플라보노이드 함량

총 플라보노이드 함량은 quercetin을 기준 물질로 작성한 표준곡선(y=0.7694x+0.0528, R2=0.9953)을 기반으로 분석하였다. 평균 흡광도는 0.149±0.007 mg/mL였으며, 환산 결과 총 플라보노이드 함량은 14.9±0.7 mg QE/g dry weight로 나타났다(Table 3). 이는 추출물이 상당량의 플라보노이드계 항산화 성분을 포함함을 의미한다. 플라보노이드는 금속 이온 킬레이션, ROS 제거 등 다양한 항산화 기전에 관여하는 핵심 성분으로(Metodiewa et al., 1997; Panche et al., 2016; Cherrak et al., 2016), 본 추출물의 DPPH 및 ABTS 라디칼 소거능과도 밀접한 연관성을 가진다. 고함량의 폴리페놀과 플라보노이드는 피부 산화 스트레스 완화 및 노화 예방을 위한 기능성 화장품 원료로 활용될 수 있음을 시사한다.

5. UHPLC-MS를 통한 유효성분 분석

UHPLC-MS 분석 결과, Vicia cracca 추출물에서 diosmin을 포함한 총 15종의 유효성분이 RT 및 m/z 값을 기준으로 확인되었다(Figure 3, Table 4). 주요 피크 중 diosmin (RT 12.22 min, m/z 607.18), luteolin-7-rutinoside (RT 10.79 min, m/z 593.17), afzelin (RT 13.16 min, m/z 431.10) 등은 database의 표준 값과 일치하였다. 이들 화합물은 플라보노이드 및 페놀계 성분으로, 항산화, 항염, 세포 보호 등의 생리활성이 보고된 바 있다(Huwait & Mobashir, 2022; Han et al., 2022). 특히 diosmin은 본 추출물에서 가장 높은 함량으로 검출되었으며, 자유 라디칼 소거와 미세혈관 보호 등 다양한 기능성이 알려져 있다. 또한 luteolin-7-rutinoside, afzelin, rutin, quercitrin, salidroside 등은 항산화 및 항염 효과를 통해 추출물의 생리활성 기전을 뒷받침한다(Ganeshpurkar & Saluja, 2017; Riaz et al., 2018). 이러한 결과는 Vicia cracca 추출물이 다중 항산화 성분을 함유한 복합 식물소재임을 보여준다. 또한 Table 4에서는 총 15종의 지표 성분이 확인되었으나, 실제 chromatogram (Figure 3)에서는 농도가 낮거나 검출 한계(limit of detection) 미만인 일부 화합물은 피크가 명확히 관찰되지 않았다. 이는 추출 용매 조건, 기기 감도, 이온화 효율 등의 차이에 따른 것으로 판단된다. 따라서 Vicia cracca 추출물의 주요 생리활성은 diosmin, luteolin-7-rutinoside, afzelin 등 주요 플라보노이드 성분의 기여에 의한 것으로 해석된다.

Conclusion

본 연구는 Vicia cracca 추출물의 항산화 활성과 식물화학 성분을 분석하여, 기능성 화장품 원료로서의 가능성을 평가하고자 하였다. 이를 위해 DPPH 및 ABTS 라디칼 소거능 분석, 총 폴리페놀(TPC) 및 총 플라보노이드(TFC) 함량 측정, 그리고 UHPLC-MS 기반 유효성분 분석을 수행하였다. 그 결과, 추출물은 DPPH와 ABTS 분석에서 농도 의존적인 라디칼 소거 능력을 보였으며, 이는 폴리페놀 및 플라보노이드의 풍부한 함량과 밀접하게 관련되었다. UHPLC-MS 분석을 통해 diosmin, luteolin-7-rutinoside, afzelin, rutin 등 항산화 활성이 보고된 플라보노이드 및 페놀계 화합물이 확인되었으며, 이들 성분은 선행연구에서 ROS 제거, 항염, 콜라겐 분해 억제 및 광노화 방지 등의 생리활성이 보고된 바 있다(Huwait & Mobashir, 2022; Han et al., 2022). 따라서 Vicia cracca 추출물은 항산화 작용을 기반으로 산화 스트레스에 의한 피부 손상 완화 및 노화 억제에 기여할 가능성이 있음을 시사한다. 기존 연구들이 주로 간 보호 효과(Shokrzadeh et al., 2018) 또는 제한적인 항산화 활성 보고에 국한되었던 것과 달리, 본 연구는 다중 항산화 지표(DPPH, ABTS, TPC, TFC)와 UHPLC-MS 기반 분석을 병행하여 보다 종합적이고 정량적인 평가를 수행하였다. 이 결과는 Vicia cracca 추출물이 항산화 뿐 아니라 피부 생리활성 개선을 위한 잠재적 천연 소재임을 제시하며, 국내 자생 식물 자원으로서 환경적 지속 가능성과 원료 안전성 측면에서도 화장품 산업의 친환경 트렌드와 부합한다. 다만, 본 연구는 in vitro 항산화 실험과 UHPLC-MS 기반 성분 분석에 한정되어 실제 피부 적용 환경에서의 생리활성을 직접적으로 검증하지는 못하였다. 또한 다수의 성분이 확인되었으나, 개별 화합물이 항산화 활성에 기여하는 정도를 분리하여 규명하지는 못하였다. 따라서 향후 연구에서는 세포 및 인체 적용 시험을 통한 안전성 및 유효성 평가와 주요 성분별 작용 기전 규명, 그리고 실제 화장품 제형 적용 연구가 병행되어야 할 것이다.

NOTES

Author's contribution
DWL designed the experiments, interpreted the results, and wrote the manuscript.
SB supervised the overall research process and critically revised the manuscript.
All antioxidant and phytochemical assays (DPPH, ABTS, TPC, TFC, and UHPLC-MS) were conducted by an external facility following the experimental protocols designed by the authors. All authors have read and approved the final version of the manuscript.
Author details
Da-Woom Lee (Graduate Student)/Seunghee Bae (Professor), Department of Cosmetics Engineering, Konkuk University, 120 Neungdong-ro, Gwangjin-gu, Seoul 05029, Korea.

Figure 1.

DPPH radical scavenging activity of Vicia cracca extract.

The DPPH radical scavenging activity of Vicia cracca extract was evaluated at concentrations ranging from 0.06 to 32.00 mg/mL, with AA (ascorbic acid, 160 µg/mL) used as the positive control. The scavenging effect increased in a dose-dependent manner, showing a maximum activity of 98.5% at 32.00 mg/mL, which was comparable to that of ascorbic acid. The IC50 values were 3.65 mg/mL for the extract and 21.04 µg/mL for ascorbic acid, respectively, indicating strong radical scavenging potential of the extract. Results are expressed as mean±SD (n=3). Statistical significance compared with control: *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001.
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Figure 2.

ABTS radical scavenging activity of Vicia cracca extract.

The ABTS radical scavenging activity of Vicia cracca extract was evaluated at concentrations ranging from 0.06 to 32.00 mg/mL, with AA (ascorbic acid, 160 µg/mL) used as the positive control. The scavenging effect increased in a dose-dependent manner, showing a maximum activity of 97.4% at 32.00 mg/mL, which was comparable to that of ascorbic acid (97.9%). The IC50 values were 2.30 mg/mL for the extract and 15.98 µg/mL for ascorbic acid, respectively, indicating strong ABTS radical scavenging potential. Results are expressed as mean±SD (n=3). Statistical significance compared with control: **p<0.01; ***p<0.001.
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Figure 3.

UHPLC–MS chromatogram of Vicia cracca extract showing the major identified phytochemicals.

The retention times (RT) of the main peaks corresponded to those listed in Table 4, where compounds such as diosmin (12.22 min), luteolin-7-rutinoside (10.79 min), afzelin (13.16 min), and diosmetin (17.05 min) were identified based on RT and m/z values by comparison with authentic standards and reference data from the built-in database of Chromeleon 7 software (Thermo Fisher Scientific, USA).
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Table 1.
Yield and contents of Vicia cracca extract
Sample Extract content (mg/g dry weight) Yield (%)
Vicia cracca 360 36.0%

The extract of Vicia cracca was obtained using 70% ethanol and ultrasonic extraction (40 kHz, 1 h). The yield was calculated based on the weight of the dried extract relative to the initial plant material. The extract content is expressed as milligrams of extract per gram of dry weight (mg/g dry weight).

Table 2.
Total phenolic content (TPC) of Vicia cracca extract
Sample TPC (mg GAE/g dry weight) SD
TPC 27.4 1.1

Total phenolic content (TPC) of Vicia cracca extract was determined using the Folin–Ciocalteu method. Results are expressed as milligrams of gallic acid equivalent per gram of dry weight (mg GAE/g dry weight) and presented as mean±standard deviation (SD, n=3).

Table 3.
Total flavonoid content (TFC) of Vicia cracca extract
Sample TFC (mg QE/g dry weight) SD
TFC 14.9 0.7

Total flavonoid content (TFC) of Vicia cracca extract was quantified using the aluminum chloride colorimetric method. Results are expressed as milligrams of quercetin equivalent per gram of dry weight (mg QE/g dry weight) and presented as mean±standard deviation (SD, n=3).

Table 4.
Phytochemical compounds identified in Vicia cracca extract by UHPLC–MS analysis
No Compound RT (min) m/z [M–H]- Conc. (ng/mL)
1 Diosmin 12.22 607.18 290.91
2 Luteolin 7-rutinoside 10.79 593.17 113.10
3 Afzelin 13.16 431.10 70.65
4 Salidroside 6.07 299.12 22.00
5 Diosmetin 17.05 299.06 18.94
6 Salicylic acid 11.43 137.02 14.66
7 Diosmetin-7-O-β-D-glucopyranoside 12.76 461.11 12.50
8 Allantoin 1.14 157.04 11.56
9 p-Coumaric acid 9.94 163.04 10.16
10 Rutin 10.69 609.15 8.80
11 Vanillin 9.56 151.04 7.41
12 Vanillic acid 7.80 167.04 6.32
13 Quercitrin 12.08 447.09 6.09
14 Luteolin 14.90 285.04 5.00
15 Astragalin 11.97 447.09 2.22

Retention time (RT), mass-to-charge ratio (m/z), and quantitative concentrations (ng/mL) were identified and calculated using Chromeleon™ 7 software (Thermo Fisher Scientific, USA) by comparison with database reference values and calibration curves of authentic standards.

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